Citometría
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La citometría de flujo es una técnica de análisis celular multiparamétrico cuyo fundamento se basa en hacer pasar una suspensión de partículas (generalmente células) alineadas y de una en una por delante de un haz de láser focalizado. El impacto de cada célula con el rayo de luz produce señales electrónicas que posteriormente serán digitalizadas para permitir la medida simultánea de varios parámetros relacionados con características intrínsecas de la célula (tales como el tamaño y la complejidad del nucleo, citoplasma etc), o bien de parámetros relacionados con caracterísitcas antigénicas de la célula, todos ellos medibles por el fenómeno de la fluorescencia.
El objetivo principal del Servicio de Citometría de Flujo del IPBLN es prestar soporte científico y tecnológico a los diferentes grupos de investigación que así lo requieran, ya sean de ámbito público o privado, mediante el asesoramiento a los usuarios sobre los principios que rigen la técnica y los análisis de los resultados obtenidos una vez ésta es aplicada.
Por otro lado dicho soporte también se basa en el desarrollo de nuevas aplicaciones, y puesta a punto de diferentes protocolos.
Finalmente, aprovechar el valor de esta técnica, no solo a nivel analítico, sino también a nivel preparativo, mediante la realización de Separaciones celulares, mediante la técnica de «Sorting»
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Objetivos
Equipamiento
FACScalibur Citómetro analizador básico:
Dispone de 2 láseres, azul (488nm) y rojo (633nm), permitiendo analizar hasta 6 parámetros en nuestra muestra: tamaño (Forward Scatter), complejidad celular (Side Scatter) y 4 fluorescencias recogidas como FL1 (verde), FL2 (naranja) , FL3 (roja) y FL-4 (azul). El software que lo rige, Cell Quest, le permite capacidad de compensación entre láseres, pudiendo compensar una fluorescencia con la inmediatamente anterior y con la inmediatamente posterior.
FACSymphony Citómetro analizador de última generación:
Dispone de 5 laseres: azul (488nm), rojo (633nm), violeta (405nm), amarillo/verde (561nm) y U.V. (355nm), permitiendo detectar hasta 30 canales. Tiene incorporado un lector de placas de 96 o 384 pocillos (HTS: High Throughput Sampler) para realizar citometrías de múltiples muestras en muy poco tiempo. El software que lo rige es FACSDiva 9.1. que permite hacer las compensaciones automáticamente. Tiene incorporado el programa FLOWJO v10 para el análisis posterior de los datos.
FACSaria III Citómetro separador de última generación:
Dispone de 4 láseres: azul (488nm), rojo (633nm), violeta (405nm) y amarillo/verde (561nm). Permite la detección en 16 canales de fluorescencia. El software que lo rige es FACSDiva 9.1. que permite hacer las compensaciones automáticamente. Tiene incorporado el programa FLOWJO v10 para el análisis posterior de los datos.
Bioplex 2000 Citómetro de flujo para el análisis multiparamétrico de moléculas en soluciones líquidas:
Bio-Plex es un citómetro de flujo especializado que permite detectar y cuantificar hasta 100 moléculas diferentes (proteínas, péptidos o ácidos nucleicos) de una muestra en un solo pocillo. Se basa en la tecnología xMAP de Luminex, y la configuración en microplacas permite el análisis automático de placas de 96 pocillos con una gran velocidad y precisión. Es una alternativa a los ELISAs tradicionales y está especialmente adaptado para utilizar los kits comercializados por Bio-Rad.
Luminex comercializa hasta 100 grupos de microsferas, cada una con un color diferente. Cada grupo de microsferas está recubierto con un reactivo específico para cada bioensayo particular, permitiendo la captura y la detección del analito de interés en una muestra compleja en solución.
La lectura de la placa se realiza en plataforma Luminex donde las esferas se aspiran para hacerlas pasar por un canal donde cada una es incidida por láseres distintos. El primero, en rojo, excita la esfera y detecta el código de la misma, discriminando entre una molécula y otra; el segundo láser, en verde, excita el marcaje fluorescente y, de esta forma, cuantifica la señal emitida por cada una de las esferas. El equipo cuenta con un software de análisis que permite la utilización de métodos de regresión de 5 parámetros que dan como resultado la concentración en órdenes de pg/ml.
Servicios Ofrecidos
Asesoramiento a los usuarios del servicio de citometría de flujo.
Iniciación y entrenamiento de los distintos usuarios que hacen uso por primera vez de la técnica.
Supervisión de las operaciones diarias en los citómetros de flujo analizadores.
Asistencia a los usuarios en los problemas con los equipos.
Asistencia sobre metodología y diseño experimental.
Analisis Multiparamétrico complejo
Identificación de Genes reporteros: variantes de GFP
Ensayos de proliferación celular
Técnica de TUNNEL, ensayos con Annexina V, y Rhodamina
Ensayos de viabilidad celular
Ciclo Celular
Ensayos funcionales
Medida ratiométrica de Fluo / Fura Red para estudiar flujo de Calcio
Análisis multiparamétrico de moléculas en soluciones líquidas (Bio-Plex)
Separación celular
Tarifas
| OPIS/AGE/Universidad | Otros | |
|---|---|---|
| Citometro Analizador FACSymphony | ||
| Con Operador | 67.64 €/h | 67.64 €/h |
| Con Laser U.V. | 83.79 €/h | 83.79 €/h |
| Citometro Separador FACSAria III | ||
| SORTING | 57.46 €/h | 62.93 €/h |
| Análisis de Datos de Citometría | ||
| Análisis | 41.81 €/h | 45.79 €/h |
* Todos los servicios se pueden usar en fracciones de media hora.